自杀基因HSV-tk对鼻咽癌细胞株杀伤作用机制的研究

【作者】 余少卿； 章如新； 熊俊； 赵恩鹏； 温武； 文军慧； 沈茜；

【机构】 第二军医大学长海医院耳鼻咽喉科； 第二军医大学基础医学部； 复旦大学遗传学研究所； 第二军医大学长海医院中心实验室；

【摘要】 [目的]探讨自杀基因单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶(herpes simplexvirus-thymidine kinase,HSV-tk)对鼻咽癌细胞株的杀伤作用机制。[方法]将HSV-tk基因通过脂质体法转染鼻咽癌细胞株,经G418筛选挑选阳性细胞克隆并经RT-PCR鉴定,加入前体药物戊环鸟苷(ganciclovir,GCV)后,观察对鼻咽癌细胞的杀亡状况。[结果]MTT法显示转染的鼻咽癌细胞株在加入GCV后,存活率明显降低,与未转染基因的鼻咽癌细胞株存活率相比,有显著性差异(P<0.01)。流式细胞仪显示与未加GCV的细胞相比,转染基因的细胞加入GCV后生长受到明显的抑制,S期细胞数从占总细胞数的35.71%降至17.41%,凋亡率从1.33%增长为8.15%,并出现明显的凋亡峰。电镜下,转染细胞经GCV作用后大量细胞发生凋亡,可观察到凋亡细胞内特征性的凋亡小体。[结论]自杀基因HSV-tk对鼻咽癌有明显的杀伤作用,其可能性机制是HSV-tk基因联合GCV,对NPC细胞产生选择性细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡。更多还原