[³⁵S]—甲硫氨酸参入法测定Aβ的分泌速率及补益药活性成分的影响

【作者】 胡雅儿； 李爱民； 夏宗勤；

【机构】 上海第二医科大学细胞调控研究室；

【摘要】 目的:建立灵敏的测定培养细胞Aβ分泌的方法,观察几种不同性质补益中药活性成分对Aβ生成速率的影响。方法:用〔³⁵S〕3—甲硫氨酸标记转染APP695基因的SK—N—SH细胞,所获细胞上清以AB_22-35单克隆抗体进行免疫共沉淀,结合Westem迎迹法,最后用图象分析仪分析放射自显影Aβ条带的灰度值。结果:以配对对照（不加药,加载体）的Aβ条带灰度值为1,计算各用药组灰度的相对强度,发现本方法能隐定地测到细胞在24小时内分泌的Aβ量,同一受试样品再不同批实验中的变异（CV）在17%～32%之间。在培养液中中药活性成分的浓度1×10^-5mol/L时,三种受试物质中有一种对Aβ的分泌速度有明显抑制作用,均数±标准差为0.65±0.17,配对F—检验P<0.01。另两种受试物则无作用（为1.06±0.18和1.03±0.33）。结论:本文建立的测定Aβ分泌速率的方法具有较好灵敏度和稳定性,并且初步观察到某些补益中活性成分有抑制Aβ分泌的作用。更多还原