丹参注射液对肾小求系膜细胞增殖及产生IL—6、Ⅳ型胶原影响的实验研究

【作者】 高鸣； 杨志云； 马琼英；

【机构】 湖北中医学院附属医院肾内科；

【摘要】 目的:通过观察丹参注射液对体外培养家兔肾小球系膜细胞增殖及产生IL—6、N型胶原的影响,探讨活血化瘀中药丹参注射液治疗以系膜增生为主要病理改变的肾脏疾病的细胞生物学机理.方法:(1)实验1取3月龄日本大耳白兔双肾皮质制成肾小球悬液,接种于培养瓶中培养,系膜细胞逐渐从肾小球中长出,倒置相差显微镜观察其生长发育情况,照像做形态学鉴定.并以台盼兰拒染法来计算细胞存活率.(2)实验Ⅱ在第二代系膜细胞培养48h后,加入含5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml不同浓度血小板衍生生长因于(platelet de-rived growth factor PDGF)的培养液,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,以确定最佳实验用药浓度.(3)实验Ⅲ在上述相同的细胞培养条件下,加入上述选定浓度的PDGF及37.5mg/ml、75mg/ml、150mg/ml浓度的丹参注射液的培养液,用MTT比色法检测细胞增殖情况、竞争性放射免疫分析法测细胞分泌白细胞介素—6(IL—6)含量、夹心酶联免疫法测细胞分泌Ⅳ型胶原含量.结果:(1)实验:培养14天后,肾小球系膜细胞形态观察:胞体呈棱形或不规则星形及三角形,中央有一清晰的卵圆形核,胞质向外伸出数个长短不一的突起.系膜细胞生长较慢,14天后存活率趋于稳定,为75.6%,21天为80.3%.(2)实验ⅡA值:PDGF在2.5—10ng/ml浓度之间明显刺激系细胞生长,并呈剂量依赖性,P<0.01差异有显著性意义,大于10ng/ml浓度其效应趋向于饱和.因此,选定PDGF10ng/ml浓度为最佳实验用药浓度.(3)实验ⅢIL—6含量、Ⅳ型胶原含量:75mg/ml、150mg/ml,丹参注射液治疗组与刺激组比较P<0.01,与正常对照组比较,P>0.05.结论:1、建立了生长状态良好、生物学特性稳定、纯度较高的家兔肾小球系膜细胞体外培养体系.2、10ng/ml浓度的血小板衍生生长因子对体外培养的家兔肾小球系膜细胞增殖的刺激作用最强,选定此浓度为最佳实验用药浓度.3、丹参注射液对10ng/ml浓度的PDGF刺激系膜细胞增殖及产生IL—6、Ⅳ型胶原有明显抑制作用,且呈剂量依赖性.基于以上研究,我们推测丹参注射液治疗以系膜增生为主要病理改变的肾脏疾病的机制,与该制剂抑制系膜细胞增殖、IL—6产生及Ⅳ型胶原合成有密切关系.更多还原