盐酸苯环壬酯及其旋光异构体对NMDA神经毒性的保护作用的研究比较

【作者】 任振宇； 彭双清； 刘克良； 仲伯华； 刘河；

【机构】 军事医学科学院毒物药物研究所；

【摘要】 目的:研究并比较盐酸苯环壬酯(CPG,胆碱能受体阻断剂,用于晕动病治疗的国家一类新药)及其不同旋光异构体[R(-)CPG & S(+)CPG]对NMDA神经毒性的保护作用。方法: 体内实验:参照Leader等人建立NMDA惊厥致死模型。昆明小鼠,(?),(20±2)g,动物随机分组:NMDA对照组,CPG消旋体预处理组,R(-)CPG预处理组,S(+)CPG预处理组,各预处理组又分别分为4个剂量组(3,6,12,24 mg·kg-1)每组9只。动物分别腹腔注射不同剂量的CPG消旋体或其旋光异构体(NMDA对照组注射等量的生理盐水),30min后动物全部给予致死剂量的NMDA(155 mg·kg-1,ip),观察2小时内小鼠存活状况。体外实验:采用NGF 诱导分化后的PC 12细胞为实验对象,分别设不同药物预处理组和NMDA对照组,预处理组分别给予MK-801、CPG消旋体或其异构体,10分钟后给予损伤剂量的NMDA(3mmol·L-1), 作用特定时间后分别行形态学观察及细胞存活率(MTT法),LDH漏出率(LDH试剂盒), 凋亡率(Hoechst33258荧光染色)等的检测。结果:体内实验显示CPG及R(-)CPG分别在 12,6 mg·kg-1发挥显著保护效应,均使小鼠存活率由NMDA对照组的0/9升高到5／9(P<0．05,vs NMDA对照组),且R(-)CPG发挥最大保护效应时所需剂量远低于CPG,而S(+)CPG的保护作用无显著性意义;体外实验:形态学观察显示,正常分化后的PC12细胞胞体呈多极形, 折光性强,立体感明显,突起交织呈网状,NMDA 3 mmol·L-1作用24h,细胞崩解,突触断裂, CPG及R(-)CPG 5 μmol·L-1预处理,明显减轻NMDA所致损伤的形态学改变,多数胞体基本完整,略有肿胀,突触尚存,S(+)CPG预处理对形态学改变较轻微,细胞体仍有崩解,作用不及CPG及R(-)CPG;CPG及R(-)CPG 5 μmol·L-1预处理均显著提高细胞存活率,分别为正常对照组的(72．58±5．13)％和(80．48±6．19)％,显著高于NMDA损伤组的(63．55±8．42) ％(P<0．05,vs NMDA对照组),S(+)CPG对细存活率无显著影响;CPG,R(-)CPG及S(+)CPG 5 μM均可显著抑制NMDA所致的LDH漏出增加,且CPG和R(-)CPG的保护效应与NMDAR 特异性阻断剂MK-801(10 μmol·L-1)的效应相当,S(+)CPG的作用不及R(-)CPG;NMDA损伤组凋亡平均荧光强度几乎是正常对照组的2倍,以正常对照组荧光值为100％,MK-801, CPG,R(-)CPG及S(+)CPG均可显著降低NMDA所致的凋亡增加效应,分别为(126±17)％, (149±27)％,(130±17)％,(159±30)％(P<0．01,vs NMDA损伤组)。结论:CPG消旋体在体内体外均可对抗NMDA神经毒性,保护效应与MK-801相当,其中R(-)CPG作为优性异构体而存在,神经保护效应明显强于S(+)CPG。更多还原