功能基因芯片在重组人P53腺病毒逆转顺铂耐药分子机制研究中的应用

【作者】 苏丹； 吕汪霞； 冯建国； 马胜林；

【机构】 浙江省肿痛医院；

【摘要】 背景和目的我们前期的实验结果证实细胞内p53功能的丧失与非小细胞肺癌顺铂耐药密切相关,人p53腺病毒(Adp53)可恢复耐约细胞H1299对顺铀的敏感性,然而其分子作用机制不太明确。Adp53作用涉及基因多,顺铂耐药机制复杂,检测几个基因的改变可能难以全面阐明。因此,为了能比较全面地了解Adp53逆转顺铂耐药的作用机制,我们采用了p53信号传导通路芯片和 DNA损伤信号通路芯片来分析其可能的逆转机制。方法实验分为4组,转染p53(150MOI)48小时的H1299细胞组,转染p53 48小时后加顺铂(5ug／ml) 作用 48小时的H1299细胞组,顺铂(10ug／ml)作用48小时的H1299细胞组,以未做任何处理的H1299细胞为空白对照。分别提取各组细胞的总RNA,反转录合成cDNA生物素标记探针。空白对照组和转染p53 H1299细胞组分别与p53信号传导通路芯片杂交,转染p53 后加顺铂作用的H1299细胞组和顺铂单独作用的H1299细胞组分别与DNA损伤信号通路芯片杂交。经化学发光检测,和图象采集,最后进行数据分析。结果p53信号传导通路芯片结果显示转染p53后H1299细胞内p53、Mdm2、E2F基因的表达明显升高,细胞周期调控蛋白p21、PIG8、 Hsp70表达升高,信号传导分子蛋白激酶C、有丝分裂原激活蛋白酶8作用蛋白2(JIP2)被大量激活。我们前期的实验结果显示H1299在浓度为10ug／ml的顺铂作用下,细胞杀伤率仅为27．5％,而转染p53的H1299细胞在浓度为5ug／ml的顺铂作用下, 细胞杀伤率可达50％。比较这两组DNA损伤信号通路芯片的结果显示转染p53的H1299 在顺铂损伤时,损伤识别主要由CDS1、FOX03A基因完成,DNA损伤诱导转录子3、Stratifin、 p53、Mdm2、Wip1基因大量表达。在凋亡通路中大部分基因被激活,其中以BAX、凋亡蛋白酶激活因子(APAF1)、TNFR超家族蛋白为主。在损伤修复通路中GADD45A、RRM2B、 ERCC1、ERCC6表达上调。结论Adp53逆转顺铂耐约的机制主要是p53恢复了细胞内对损伤刺激的信号通路,诱导了由肿瘤坏死因子受体超家族蛋白、Bcl-2／Bax所介导的凋亡通路。更多还原