Dicer1蛋白高表达小鼠模型的建立

【作者】 郑志红； 汪瑛； 于洋； 扬葳； 孙开来；

【机构】 中国医科大学动物部； 中国医科大学遗传教研室；

【摘要】 Dicerl 蛋白功能是将具有颈环结构的 RNA 或双链 RNA 剪切成～21nt 的成熟 miRNA(或 siRNA)。miRNA 是真核细胞特有的调节其他基因表达活性的一类非编码小 RNA,在生物发育过程中发挥着重要的作用。目前人类发现约有200～255个 miRNA,其功能大部分尚不十分消楚。DICER1基因敲除的小鼠在胚胎发育过程中就发生死亡,影响了基因功能的进一步研究。通过转基因技术建立 Dicer1蛋白高表达转基因小鼠模型是另一个必要的途径及手段。 pcDNA3.1-Dicer1转基因构件经酶切、纯化后通过显微注射方法导入 BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的 ICR 受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用 PCR 和 Southern 方法检测鼠尾 DNA 鉴定基因型,通过 western blot 检测 Dicer1蛋白表达。经 PCR 和 Southern 检测获得6个 founder,其中3个 founder 可传递阳性后代。对3个 founder 的小鼠进行 RT-PCR 检测和 western blot 分析发现 Dicer1蛋白在肝脏、脾脏、肾脏、肺内均表达增高:小鼠肝脏、脾脏均明显增大:雌性小鼠可传递后代,但年龄较大的雌性小鼠胚胎发育异常(死胎)。该模型为进一步研究 DICER1基因功能及 miRNA 的表达及功能等奠定了基础。更多还原