let-7a调控人肺腺癌细胞株A549中NIRF基因的表达

【作者】 何晓燕； 彭惠民； 陈俊霞； 欧阳溪；

【机构】 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室；

【摘要】 NIRF 是近年来新发现的一种核蛋白,其蛋白质内部含有 UBL(ubiquitin-like)、 PHD(plant homeodomain)、SRA(set and ring associated)、RING(really interesting new gene)结构域以及一个 Rb 结合位点。先前的研究表明 NIRF 在很多肿瘤细胞株中呈高表达,并且参与了细胞周期调控。最近,通过生物信息学预测,我们在 NIRF 的3’非翻译区(3’UTR) 发现了多个 let-7a 的互补结合位点,而 let-7a 作为肺癌中表达特异性降低的 microRNA 分子之一,其相关研究备受关注。为了探明 NIRF 是否直接受到了 let-7a 的调控,我们构建了含有 NIRF 基因3’UTR 的荧光素酶报告载体,随后与 let-7a mimics 共转染至 HEK293细胞中, 利用双荧光素酶报告基因检测系统观察其对荧光素酶活性的影响;同时,我们还构建了 let-7a 真核表达载体,借助脂质体转染技术将其转染至 A549细胞中,经 G418筛选出稳定表达 let-7a 的 A549细胞株,采用 RT-PCR 和 Western blot 分别检测 NIRF mRNA 和蛋白的表达水平变化。结果表明 let-7a 通过与 NIRF 3’UTR 中的互补位点结合抑制荧光素酶的活性并下调 NIRF 蛋白的表达。下一步拟对 NIRF 的下游效应进行深入研究,以揭示 NIRF 在 let-7a 介导的肿瘤发生发展过程中的作用。更多还原