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甲醇利用菌MB119丝氨酸乙醛酸氨基转移酶基因(sga)的研究
【机构】 广西大学生命科学与技术学院；
【摘要】 sga基因是大多数甲基营养细菌中丝氨酸循环途径里的一个关键酶基因, 与单碳化合物的同化及二碳化合物的代谢有着密切的关系。根据已报道的甲基营养菌Methylobacterium extorquens AM1的sga基因序列,合成寡核苷酸引物, 用本实验室分离到的甲醇利用菌MB119的染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增出sga基因,DNA测序分析表明该片段与已报道的甲基利用菌AM1的sga基因在核苷酸水平有93％的同源性,氨基酸水平具有85%的同源性。利用自杀质粒 pK18mok)构建含有sga基因内部分片段的重组质粒,在pRK2073质粒的帮助下将该重组质粒通过三亲本结合后从E．coli DH5 α中导入原始菌株MB119中,经过进一步同源单交换,在抗性平板上筛选sga基因被pK18mob插入的突变菌株 MB119sTB,并通过PCR和southern杂交验证,选择发生正向突变的突变株用于进一步研究分析。分析结果表明突变菌株的SGAT的酶活性消失,同时失去了在以甲醇为唯一碳源的培养基上生长的能力,但仍能在二碳化合物和多碳化合物上生长。
- 【会议录名称】 第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集
- 【会议名称】第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会
- 【会议时间】2006-10
- 【会议地点】中国湖北武汉
- 【分类号】Q933
- 【主办单位】中国遗传学会微生物遗传学专业委员会