应用siRNA抑制β⁶⁵⁴地中海贫血过剩α珠蛋白和异常剪接β珠蛋白的表达

【作者】 谢书阳； 黄淑帧； 张敬之； 曾凡一； 任兆瑞； 曾溢滔；

【机构】 上海交通大学医学遗传研究所；

【摘要】 β654地中海贫血是中国人最常见的β地贫之一,是由于β珠蛋白基因第二内含子654位C→T 点突变导致的剪接缺陷,产生一种异常剪接的mRNA,可致α／β珠蛋白链合成的不平衡,使红细胞寿命缩短,骨髓造血无效。由于β-珠蛋白合成速率降低,造成β-珠蛋白肽链缺乏,而使α珠蛋白肽链相对增多,多余α链沉积可以使细胞膜受到损伤。为了探讨siRNA能否有效抑制过多α珠蛋白肽链和β654异常剪接的mRNA的危害,我们设计和构建了特异于人α珠蛋白mRNA或异常剪接β珠蛋白 mRNA的siRNA干扰载体(,分别转染K562和HeLaβ654细胞,应用RT-PCR、定量PCR和ELISA 分析上述干扰对抑制α珠蛋白mRNA和异常剪接β珠蛋白mRNA表达的抑制作用。结果显示,本文构建的特异性siRNA载体能有效地抑制α珠蛋白mRNA的表达,α/γ-珠蛋白mRNA的比值从对照组的1．03±0．04下降到siRNA实验组的0．41±0．03(图1);反映细胞内α珠蛋白含量的胎儿型血红蛋白 (HbF,α2γ2)水平从对照组的214．1±6．1 ng／mL减少为siRNA实验组的150．1±7．8 ng／mL(表1); 特异于异常剪接β珠蛋白mRNA的siRNA载体能使HeLa β 654细胞中异常剪接β珠蛋白mRNA的含量降低至60％以上(图2,表2)。本研究为通过siRNA降低过剩α珠蛋白或抑制异常剪接β珠蛋白 mRNA的途径来治疗β地中海贫血提供了科学基础。更多还原