人参皂甙Rg3诱导膀胱移行细胞癌细胞系EJ的凋亡作用

【作者】 陈俊霞； 彭惠民； 蒲淑萍； 郭玉萍；

【机构】 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室；

【摘要】 目的:人参皂甙(Ginsenoside)Rg3是从红参中微量提取的中药单体, 实验证实Rg3能抑制动物体内移植瘤的生长、浸润和转移,但其确切的分子机制还不清楚。研究表明Rg3是相对安全和有效的药物,无毒副作用。因此,对人参皂甙Rg3的研究是一个吸引人的领域。膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,具有晚期恶性度加重和易复发的特点。术后化疗是膀胱癌最重要的辅助治疗措施, 近年来寻找安全、有效的抗肿瘤药物,一直是令人关注的研究方向。本实验以人膀胱癌细胞EJ为工作模型,研究Rg3对细胞生长抑制和诱导凋亡作用,并初步探讨其作用机理,为膀胱癌的临床治疗提供实验依据和理论基础。方法:用一定浓度的Rg3处理膀胱移行细胞癌细胞系EJ细胞,MTT法检测增殖活力和IC50; Hoechst 33258荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率;免疫细胞化学染色观察caspase-3蛋白表达的变化,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果:Rg3抑制EJ细胞生长抑制率之间有显著的浓度依赖关系,Rg3处理EJ细胞48h的IC50为125．5μg／ml;荧光显微镜下观察到经150μg／ml Rg3处理EJ细胞24 h和48h后,细胞出现典型的凋亡形态,即体积变小,染色质凝集、核片段化、凋亡小体、核内可见致密的颗粒状荧光并呈时效依赖关系,而对照组细胞核呈弥漫均匀荧光,无凋亡细胞的特征;流式细胞术结果表明Rg3能诱导细胞凋亡和调节细胞周期,用75μg／ml Rg3处理EJ细胞24 h和48h及 150μg／ml的Rg3处理EJ细胞48h后,S期和G2／M期的细胞比率增加,G0／G1的细胞比率下降;细胞凋亡率从对照组的(1．32±0．21)％分别上升到(8．23±1．56) ％、(18．54±2．31)和(33．8±4．15)％;免疫细胞化学染色结果显示,1501ag／ml的 Rg3处理细胞24 h和48h后,显示更强的棕色信号和更高的DAB灰度,并呈时效依赖关系,从Caspase-3的表达水平上证实Rg3诱导了EJ细胞的凋亡;用75 μg／ml Rg3处理EJ细胞24 h和48h及150μg／ml的Rg3处理EJ细胞48h后,琼脂糖凝胶电泳检测出现典型的DNA梯形条带,其效应随药物浓度的增加和作用时间的延长而增强。结论:Rg3可通过诱导EJ细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。这个研究对Rg3应用于临床的肿瘤包括膀胱癌的化疗提供了有价值的实验依据,人参皂甙Rg3可望成为具有良好应用前景的抗癌药物。更多还原