肺癌相关蛋白N35的cDNA克隆初步分析

【作者】 王秦秦；

【机构】 昆明医学院第一附属医院；

【摘要】 <正>目的:利用特异性识别恶性肿瘤细胞蛋白组分的抗人肺癌单克隆抗体N-35,对构建于表达载体λgt11中的肺癌细胞cDNA文库进行原核系统表达的免疫学筛选,并对所获得的相关抗原编码基因进行克隆和鉴定,以期为肺癌的基因诊断和生物治疗提供候选靶抗原和靶基因。方法:选用E．coli．Y1090 为宿主菌,以单克隆抗体N-35为免疫探针,对构建于表达载体λgt11的肺癌细胞cDNA文库进行免疫学筛选,对获得的阳性克隆完成三次亚克隆后行PCR和Western blot鉴定,所获阳性cDNA克隆由2家不同的生物技术公司分别行核苷酸序列测定,获一致测序结果后与GENEBANK数据库进行同源性比较。结果:共获得42个能与N-35特异反应的阳性克隆,对其中1个阳性克隆进行亚克隆后经PCR扩增,经核苷酸序列测定知其cDNA插入片段长1262bp,经与GenBank数据库同源性比较,所获序列与人蛋白磷酸化酶2A催化亚单位α异构体有99％的同源性,发现由C-A的点突变,推演所编码肽链的氨基酸发生了精氨酸-色氨酸的改变。结论:此次获得的肺癌相关性抗原的cDNA基因片段,属突变型的PP2A催化亚基的编码基因,该片断的突变及其编码蛋白的糖基化与肿瘤的发生发展密切相关,有可能成为肺癌的基因诊断和生物治疗新的候选靶抗原和靶基因。更多还原