反义CenpB对V79-8细胞有丝分裂的几方面影响

【作者】 梁前进； 彭安； 王永潮；

【机构】 北京师范大学生命科学学院；

【摘要】 <正>位于真核细胞染色体主缢痕处的着丝粒(centromere)对于染色质的正确组装、纺锤体组装检验点(checkpoint)的调控和有丝分裂中染色体的准确分离等起着重要作用。在已经发现的着丝粒蛋白 (Cenps)中,CenpB是一种重要的结构性成分。我们先前的工作证明,CenpB在乳腺癌细胞中过度表达,CenpB基因表达的抑制使HeLa细胞增殖减慢、G1期停滞、S期细胞比例减少。说明正常的 CenpB基因表达是细胞正常增殖所必需的。本研究采用的V79-8细胞是一种缺乏G1和G2期的中国仓鼠成纤维细胞株,是研究基因转移对细胞增殖影响的好模型。用反义CenpB载体转染V79-8细胞,获得两个细胞株VaCbⅠ和VaCbⅡ。反义CenpB导致有丝分裂过程中细胞大小的变异在FCM中,从光的散射信号可以得到非常有价值的信息。其中常被利用的是前向角散射(0散射,FSC)和侧向角散射(90°散射)。FSC的强度与细胞的大小有关:对同一个细胞群体,FSC 强的,细胞较大;FSC弱的,细胞较小。将转染前后的V79-8细胞同步化,利用FCM检测各期细胞大小分布,结果发现,当用TdR双阻断法将细胞同步化到G1／S时,细胞株间呈现出细胞大小的差异。VaCbⅠ细胞的FSC值比对照细胞的小许多(△FS=85．4-78．8=6．6),而VaCbⅡ细胞的。FSC值与对照细胞相差无几(△FS=86．7-85．4=1．3), 可能因为VaCbⅠ经历了漫长的G1期(11．64h;对照细胞只有不到5h),在向S期过渡时细胞有一个变小的过程,其机理和意义有待研究;VaCbⅡ的G1期不太长(6．66h),未测出此变异。值得注意的是,这种细胞大小的变异只在G1／S期细胞中明显检测到,其他各期未明显检测到。反义CenpB引起多核性在经过Giemsa染色的细胞当中,发现在VaCbs细胞当中有核形态变异、多核或微核率增多现象(统计500个细胞),其中VaCbⅠ和VaCbⅡ的微核率分别是对照细胞的4．1倍和3．5倍。多核现象说明,CenpB基因表达的抑制可能造成有丝分裂紊乱,染色质分离异常。反义Cenp-B对于V79-8细胞中心体行为的影响用中心粒特异抗血清进行间接免疫荧光染色发现,对照细胞的中心体荧光较为明亮,而VaCbs 的中心体荧光相对较为暗淡。这可能因为V79-8细胞增殖快,中心粒物质复制快;而VaCbs的增殖大大放慢,中心粒物质的复制也变缓。作为纺锤体微管组织中心,中心体复制周期和核事件是协调的,因此,这里的结果暗示CenpB 的作用同中心粒的行为相联系。结论:CenpB是着丝粒成分中具有重要功能的蛋白质,其基因表达的抑制引起有丝分裂相关的细胞形态、染色质分离和纺锤体组装等多方面的异常。更多还原