乳腺高效表达人溶菌酶转基因小鼠的制备

【作者】 李国才； 孙强； 孙怀昌； 陈刚； 张泉； 施伟庆； 李厚达；

【机构】 扬州大学医学院； 扬州大学畜牧兽医学院；

【摘要】 目的研究本室构建的动物乳腺特异表达载体p205C3的表达特性。方法将人溶菌酶（hLYZ）cDNA克隆入p205C3,用获得的重组载体p205C3LYZ显微注射法建立转基因小鼠。F₀代小鼠出生后,用PCR初步检测目的基因的整合情况并用Southern杂交确认。F₀代阳性鼠与正常小鼠交配,所得F₁代小鼠以PCR检测目的基因的整合情况。F₀代及F₁代转基因母鼠分娩后第10d取乳汁以微球菌溶解法检测乳中hLYZ活性。扑杀一只表达hLYZ的转基因F₁代小鼠取重要脏器提取总RNA,以RT-PCR法检测表达的组织特异性。结果出生136只F₀代小鼠,PCR和Southern杂交检测阳性率分别为5.15%（2?5?）和2.94%（1?3?）。仅在1只F₀代雄鼠的4只F₁代阳性母鼠乳汁中检测到表达量分别为75、175、200和5μg/ml的溶菌酶。hLYZ仅在乳腺中表达。结论p205C3不仅能驱动hLYZcDNA在小鼠乳腺中高效表达,而且表达具有较强的组织特异性,可以用于动物乳腺生物反应器的研制。更多还原