鸡输卵管特异表达载体的构建及其体内表达

【作者】 高波； 宋红芹； 李碧春； 孙怀昌； 王克华； 窦套存； 丁铲；

【机构】 扬州大学畜牧兽医学院； 中国农业科学院家禽科学研究所；

【摘要】 用高保真PCR法从中国狼山鸡基因组DNA中分别扩增出卵清蛋白基因的5’-和3’-调控区,将扩增产物分别克隆入pGEM-T载体,并进行序列测定,确定与GenBank的鸡卵清蛋白基因相应区域的序列无差异。将上述调控序列插入粘粒载体,构建成鸡输卵管特异表达载体pOV。再将lacZ报告基因克隆在上述载体5’-调控区的下游,获得的重组载体命名为pOVlacZ。经脂质体包裹和翅静脉注射到产蛋鸡体内后,RT-PCR检测表明lacZ基因仅在注射鸡输卵管的膨大部表达,不能在肝、脾、肾、心等组织表达。在上述组织中,仅输卵管膨大部能检测出β-半乳糖苷酶活性(116.7mU/ml),注射雌激素对报告基因的表达具有促进作用(153,3 mU/ml),重组酶能被分泌到鸡蛋的蛋清中(17.33mU/ml)。上述结果表明,本研究克隆的鸡卵清蛋白基因调控区能有效驱动报告基因在输卵管的特异表达,构建的载体能用于鸡输卵管生物反应器的研制。更多还原