小鼠胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的永生化研究

【作者】 沈干； 丛笑倩； 杜忠伟； 吴春芳； 刘晓音； 刘伟； 曹谊林；

【机构】 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室； 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所上海；

【摘要】 探讨了小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的血管内皮细胞永生化。在体外培养系统中,以维甲酸(RA)和外源重组转化生长因子-βl(TGF-β1)诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的拟胚体(EB)分化为“圆形细胞”和由这些“圆形细胞”组成的血管样结构。经光学和扫描电镜及免疫荧光等法分析检测,证明组成血管样结构的细胞具有专一性的vWF荧光染色,表明是血管内皮样细胞。利用脂质体将人端粒酶催化亚基逆转录酶(hTERT)基因转染诱导分化中的“圆形细胞”。应用Dot-blot,RT-PCR,Western blot及免疫组织化学等方法分析、观察和证明了诱导分化的、组成血管样结构的园形细胞和被hTERT基因转染的“圆形”细胞的形态和生物学特性。结果表明,携带hTERT基因的、从ES细胞分化来的圆形细胞在体外可大量增殖,持续传代,95%以上的细胞具有血管内皮细胞特有的一些标志和管道化生长特性。因此,通过人端粒酶基因的转染途径可解决由ES细胞诱导分化而来的内皮细胞扩增和永生化问题,为构建组织工程化血管及其它人工血管的内皮化提供种子细胞来源打下基础。更多还原