口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

【作者】 杨彬； 兰喜； 殷相平； 李学瑞； 李宝玉； 方玉萍； 柳纪省；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室；

【摘要】 用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒（FMDV）基因组5′非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其VP1结构蛋白基因,将其分别克隆至双顺反子表达载体pIPES中,构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1,经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIPES中,编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后,经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录,mRNA的表达量达到了1.27×10⁶个拷贝/μL;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达,具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VP1转染IBRS-2细胞24h后,按100TCID₅₀/0.1mL的量接FMDV OMⅢ毒,结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制,使病变时间推迟约16～18h,接毒48h时的抑制率达到60%以上,蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体,为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。更多还原