猪细小病毒细胞适应株的培育及鉴定

【作者】 张超范； 崔尚金； 戚亭； 陈长木； 苗岚飞； 谢红玲； 周盛华； 岳丰雄； 刘长明； 刘霓虹；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医院所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室；

【摘要】 从临床表现为皮炎消瘦症状的仔猪肝脏中分离到一株病毒,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪细小病毒(PPV),采用仔猪原代肾细胞和传代ST细胞分离培养,经蚀斑克隆纯化,培育一株ST传代细胞培养适应毒株,命名为PPV-B02007株。免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质内。病毒感染细胞可被已知PPV阳性血清中和。免疫电镜可清晰见到聚集成团的,大小不一的病毒粒子,近似圆形,无囊膜,直径大小约20～22nm。该分离株经ST细胞培养传代,能够产生典型的细胞病变,病毒滴度随代次显著增加,第30代后毒价达107.0 TCID50/mL以上,且毒价和血凝价稳定.测序结果表明PPV-BQ2007株VP2基因与NCBI公布的皮炎型毒株Kresse株的同源性最高,同源性高达99.8%,在系统进化分支上处于同一个分支。PPV-BQ2007株传代细胞培养适应株的成功培育和鉴定,为进一步开展该病毒流行病学、致病机理、疫苗免疫与诊断研究等奠定了良好基础。更多还原