小鼠超高硫角蛋白(UHS)启动子活性研究

【作者】 刘欣； 梁洋； 原璐； 安铁洙；

【机构】 东北林业大学生命科学学院；

【摘要】 超高硫角蛋白(UHS)是毛发特有的结构蛋白之一,属于毛发角蛋白结合蛋白家族,在小鼠的角蛋白中占据重要组分。为检测UHS启动子在皮肤成纤维细胞中的表达活性,本试验根据小鼠GenBank上UHS基因5′非编码区序列设计引物,以小鼠基因组为模板,PCR扩增出671bp的特异性序列,并连接到去除CMV启动子的pAcGFP1-N1载体上,构建以GFP为报告基因的重组真核表达载体。随后,用阳离子脂质体法转染传代培养的胎鼠成纤维细胞。其结果:(1)经BLAST比对,UHS启动子与小鼠GenBank上UHS基因参考序列(M27685.1)的同源性为98.22%;在576bp处有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box,在599bp处有依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box;(2)利用倒置荧光显微镜在蓝光激发下观察转染24h的胎鼠成纤维细胞,发现GFP在成纤维细胞中的表达。上述结果表明,UHS启动子能够带动外源基因在皮肤成纤维细胞中表达。该项研究为进一步筛选小鼠毛囊中高效表达的内源启动子奠定基础。更多还原