小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备

【作者】 董林； 王艳萍； 沈志强； 余为一；

【机构】 山东省滨州市畜牧兽医研究院； 安徽农业大学动物科技学院；

【摘要】 为获取小鼠Ii编码基因,利用原核表系统进行诱导表达,提取与纯化目的蛋白,并制备其相应抗体。应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清。扩增出了与预期大小相同的700bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5kd的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体。本试验为内源性靶向Th细胞表位疫苗、肿瘤的免疫与治疗及Ii在免疫应答中的促进作用奠定了一定基础。更多还原