猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

【作者】 华秋东； 吴志军； 姜成刚； 沈楠； 陈维多； 相文华； 周建华；

【机构】 东北农业大学； 哈药集团； 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组；

【摘要】 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:819200、1:51200和1:409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性。该研究为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。更多还原