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口蹄疫病毒反向遗传操作和病毒空衣壳组装
【作者】 刘在新； 李平花； 曹轶梅； 卢曾军； 白兴文； 孙普； 郭建宏； 刘湘涛； 殷宏；
【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室/农业部畜禽病毒学重点实验室；
【摘要】 构建的口蹄疫病毒(FMDV)基因组全长cDNA克隆,置于T7启动子下游,与表达T7RNA聚合酶的真核质粒共转染BHK-21细胞,能顺利稳定的拯救获得病毒。拯救的病毒和野生型口蹄疫病毒一样,对酸敏感,当pH值低于7.0时,完整的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体。昆虫细胞的正常pH值偏酸,低于7.0,很难利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装口蹄疫病毒空衣壳结构。采用定点突变改变了Asia1型口蹄疫病毒结构蛋白的2个氨基酸。将改造和未改造的P12A基因和3C基因分组插入带双启动子的杆状病毒转移载体中,经重组获得了两株携带目的基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染High FiveTM细胞,表达了目的蛋白。电镜观察到改造的P12A基因重组杆状病毒产生了直径为25nm～30nm的类似口蹄疫病毒粒子的空衣壳结构,而未改造的P12A基因重组杆状病毒未能观察到同等大小的衣壳结构。本研究建立了稳定的口蹄疫病毒反向遗传操作技术平台,首次在昆虫细胞中组装成了FMDV完整的空衣壳结构。
【基金】 国家重大基础研究发展规划-973项目资助(2005CB523201)
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会
- 【会议时间】2008-07
- 【会议地点】中国黑龙江哈尔滨
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所