表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性

【作者】 刘红梅； 秦爱建； 刘岳龙； 金文杰； 叶建强； 陈鸿军； 邵红霞； 李迎晓；

【机构】 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室；

【摘要】 将增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)与鸡传染性法氏囊病病毒(1BDV)的VP2基因融合,插入马立克氏病毒(MDV)CVI988／Rispens的非必需区US10片段中,成功构建表达VP2融合蛋白的MDV CV1988 转移栽体pUC18-US10-VP2．将转移载体质粒与CV1988/Risigns疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),筛选获得表达VP2融合蛋白的重组MDV(rMDV)。聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)证明,rMDV传至第31代仍能稳定表达VP2融合蛋白．用rMDV免疫SPF鸡,进行1BDV攻毒保护试验,1 日龄SPF鸡分别用1000PFU、2000PFU、5000PFU的rMDV进行免疫,33日龄用100LD50的1BDV JS超强毒进行攻毒,鸡的免疫保护率分别为50％、60％、80％。值得注意的是,5000PFU的rMDV-次免疫1 日龄SPF鸡,其法氏囊组织病理损伤等级与IBD中等毒力活疫苗常规二次免疫相当(2．0／1．5),其保护效果无显著差异(p>0．05),而与非重组病毒免疫组相比较,保护效果差异显著(p<0．01),这表明构建的表达 IBDV VP2融合蛋白的rMDV可以有效地为SPF鸡群提供免疫保护作用。更多还原