猪圆环病毒2型分子标记毒株的构建及生物学特性研究

【作者】 刘长明； 危艳武； 张超范； 陆月华； 孔宪刚；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室；

【摘要】 以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆．通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入Sall制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞获得带有遗传标记的新毒株．采用免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在病毒感染细胞中检出病毒特异抗原,其抗原性、病毒形态学及基因序列与亲本毒株一致．鉴于新病毒基因组内插入一个SalI酶切位点,可用限制性片断长度多态性分析法可与野生型病毒相鉴别．新毒株经细胞连续传80代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达107．0TCID50/ml．取第60 代病毒培养物经肌肉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头,接种后表现出体温升高、进行性消瘦、被毛粗糙及体表淋巴结肿胀症状,迫杀后多种脏器中均能检测到病毒抗原与核酸．研究表明,利用感染性分子克隆手段构建带有遗传标记的PCV2新毒株,为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础．更多还原