抗隐孢子虫IgY抗体的研制与鉴定

【作者】 邵兆霞； 张龙现； 宁长申； 菅复春； 梁楠； 马超峰； 王海燕； 王荣军；

【机构】 河南农业大学牧医工程学院寄生虫教研室；

【摘要】 以雏鸡扩增禽贝氏隐孢子虫(C.baileyi)卵囊,略加改进的Sheather蔗糖梯度离心法提纯,低速离心结合滤膜微滤除菌,反复冻融及超声波破碎处理全卵囊抗原,以福氏完全和非完全佐剂制备免疫抗原,设定免疫程序,免疫165日龄开产母鸡,设置4种免疫方式,筛选最适免疫程序．结果显示应用免疫抗原量梯度增加的免疫方法,取得了满意的抗体水平,一免、二免抗原量分别为1×107个／只,2×107个／只,三免、四免抗原量均为3×107个／只,五免、六免抗原量均为5×107个／只,每次免疫间隔15～20 d,共免6次．母鸡免疫后卵黄抗体逐渐上升,四免后15 d升幅更为显著(ELISA效价1:20000),在六免后15 d,卵黄抗体水平达到1 :144 000,峰值区域(1:384 000～1:512 000)持续8周左右,6免后135 d,卵黄抗体水平仍维持在1: 144000;卵黄抗体的消长趋势与血清抗体的基本一致。间接ELISA法和免疫荧光法对获得的卵黄抗体进行鉴定,获得的IgY具有隐孢子虫属特异性。荧光法进行抗原位点定位,发现IgY抗体对卵囊的锐顶部和子孢子的识别明显强于卵囊的其他部位,这些位点存有更多的保护性抗原。以水稀释一硫酸铵盐析法纯化本次实验获得的IgY抗体,经SDS-PAGE分析提纯后的IgY抗体,主要有2条蛋白条带,即62 kDa～68 kDa左右的重链,33 kDa左右的轻链．IgY抗体在65℃以下对活性无影响,70℃15 min后活性下降20％左右,75℃15 min,活性下降了80％左右,80℃15 min活性基本无活性。IgY在pH4～10时活性无明显变化,pH<2或>11 时活性明显下降,具有良好的耐酸碱性。更多还原