牛源环孢子虫套式PCR检测方法的建立及初步应用

【作者】 肖淑敏； 李国清； 李韦华； 周荣琼；

【机构】 华南农业大学兽医学院；

【摘要】 环孢子虫(Cyclospora)是一种新近被人们重视的引起腹泻的重要病原之一。新鲜粪便直接涂片或经改良抗酸染色后镜检是目前诊断环孢子虫感染的主要方法。但由于粪便中成分复杂,常常出现假阳性或假阴性。随着分子生物学技术的广泛应用,国外学者相继建立了以APCR为基础的环孢子虫分子检测技术,并开始用于环境水样或动物粪便中环孢子虫的检测研究。本研究根据牛源环孢子虫18S rDNA序列,设计1对保守引物(NesCycF／NesCycR)和1对特异性引物(Cyclo-SF3／Cyclo-SR4),通过阳性参照摸索出该检测方法的量佳条件,建立了牛源环孢子虫套式PCR检测技术。特异性试验结果显示,该套式PCR能特异性她扩增出牛源环孢子虫基因组DNA中相应片段,与艾美耳球虫、隐孢子虫、贾第虫等10种相关原虫基因组DNA无交叉反应;敏感性试验表明该方法最低能检测到2．85×10-2fg的阳性参照DNA,比常规PCR提高了100倍。上述结果证明该套式PCR方法具有高度的特异性和敏感性。应用该套式PCR检测方法对168份奶牛临床粪样进行了检测。结果表明,该方法与传统的显微镜检查相比,其阳性符合率为100％,但不需专门的检查人员,具有简便、客观等优点。具有较好的临床应用价值。更多还原