柔嫩艾美耳球虫ET-Rho-2基因在原核和真核细胞中的表达及免疫保护性研究

【作者】 陈超； 张西臣； 李建华； 尹继刚； 宫鹏涛； 杨举；

【机构】 吉林大学畜牧兽医学院；

【摘要】 本研究将ET-Rho-2基因分别克隆入原核和真核表达载体并表达,利用原核表达的融合蛋白为包被抗原建立了检测抗柔嫩艾美耳球虫血清抗体的间接ELISA方法,并用重组抗原和真核重组DNA质粒分别免疫动物,观察其诱导产生的特异性免疫应答反应,以及对E．tenella攻击的保护作用．结果表明:(1)从E． tenella广东株孢子化卵囊中扩增出了Rhomboid蛋白家族基因ET-Rho-2。(2)构建了原核表达质粒载体 pET-ET-Rho-2,并获得了在E．coli中的表达产物,表达量为18％。经Western blotting检测具有一定的反应原性。(3)初步建立了基于Rhomboid重组蛋白的鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体的间接ELISA检测方法;用柔嫩艾美耳球虫ET-Rbo-2的重组抗原经口服接种免疫雏鸡后能诱导特异的免疫应答反应,对鸡的增重和盲肠病变记分均有一定的改善,与对照组相比差异显著(P<0．05),保护率为34．3％．(4)构建了重组校酸疫苗质粒:pVAX1-ET-Rho-2。该重组质粒转染Hela细胞获得了表达。(5)pVAX1-ET-Rho-2质粒对鸡柔嫩艾芙耳球虫的免疫保护性研究表明,肌注100μg裸质粒组免疫保护率可达83．5％。更多还原