猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅢA基因的克隆和表达

【作者】 邵美丽； 刘思国； 王春来； 郭洋； 张秀华； 郭设平； 佟恒敏；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；

【摘要】 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型参考株基因组DNA为模板,PCR方法扩增出apxⅢA基因3.1kb的片段,扩增产物克隆于pMD18-T中,重组质粒经酶切鉴定后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中不同血清型胸膜肺炎放线杆菌apxⅢA基因进行比较,结果显示核苷酸同源性均在96%以上。将该基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的BamHI/Sal I位点,成功构建了重组表达载体pGEX-apxⅢA,转化大肠杆菌BL-21(DE3)中并获得表达。SDS-PAGE结果显示,表达的融合蛋白分子量约为140 ku,与预测相符,Western blot证明该融合蛋白具有免疫学活性。该融合蛋白的成功表达为猪传染性胸膜肺炎亚单位疫苗的研制奠定了基础。更多还原