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猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白-ELISA诊断方法的建立及初步应用
【作者】 蒋智勇； 宋长绪； 黄忠； 刘燕玲； 张春红； 王浩文； 蔡汝健；
【机构】 广东省农业科学院兽医研究所；
【摘要】 根据猪圆环病毒2型(PCV2)GD株序列(AY613854),设计一对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pMD-ORF2为模板,扩增出含ORF2基因的3’端(576 bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-32a的BarnH Ⅰ和Hind Ⅲ位点间,构建重组质粒pETORF2,转化大肠杆茵Rosetta-gamiTM(DE3)进行融合表达,表达蛋白质主要以包涵体形式存在。用8mol/L尿素溶解包涵体后,利用镍离子金属螯合亲和层析法纯化蛋白,结果在SDS-PAGE上显示出一条约40ku的目的条带,纯度达到90%以上。以此纯化的表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床236份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为64.2%(152/236)。
【基金】 广东省自然科学基金项目(31990和04002083);国家“863”科技攻关项目(2003AA241110);国家食品安全重大专项(2001BA804A31)
- 【会议录名称】 第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集
- 【会议名称】第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会
- 【会议时间】2005-05
- 【会议地点】中国济南
- 【分类号】S854.4
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会