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猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达
【机构】 广东省农科院兽医研究所； 华南农业大学生命科学院；
【摘要】 根据PCV2 ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF2。将PCV2 ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2,然后用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒。通过荧光显微镜观察、PCR检测和Western blot检测证明PCV2 ORF2基因在293细胞内获得表达,ORF2多肽具有良好的免疫原性。
【关键词】 猪圆环病毒2型(PCV2)；
ORF2基因(ORF2 gene)；
重组腺病毒；
【基金】 国家863计划资助项目(批准号:2003AA241110);广东省农业攻关项目(批准号:2003B21404)
- 【会议录名称】 第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集
- 【会议名称】第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会
- 【会议时间】2005-05
- 【会议地点】中国济南
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会