五指山猪近交系精原干细胞体外分离、培养实验研究

【作者】 成钢； 冯书堂； 牟玉莲；

【机构】 中国农业科学院畜牧研究所；

【摘要】 本实验对各个不同发育阶段五指山小型猪(WZSP)近交系的睾丸组织,采用不同的消化和培养方法进行了一系列的探索、研究。实验显示:培养SSCs的最佳时限为仔猪出生后1-20日龄;对不同日龄仔猪采用不同消化方法,以DMEM为基础培养液并添加不同成分,34℃,5%CO2培养箱中饱和湿度条件下培养。可获得较好的分离培养结果;原代SSCs在培养8d后,SSCs开始增殖,桑葚状的SSCs集落悬浮或半悬浮隆突生长;对形成的SSCs集落进行AKP染色,细胞呈阳性反应;对SSCs细胞团在STO饲养层上进行传代培养,SSCs贴壁良好,培养4d左右大部分SSCs集落和单细胞消失;采用曲细精管组织贴壁培养法也同样获得桑葚状SSCs集落,细胞集落在培养5d后出现,悬浮或半悬浮生长。此外,睾丸组织在4℃PBS液中存放24h后,仍可作为SSCs分离、培养的材料。结果表明:本研究初步掌握了WZSP近交系精原干细胞体外分离、培养的技术方法,为其进一步深入研究提供了技术依据和操作方法。更多还原