鸡艾美耳球虫3-1E基因的克隆与表达

【作者】 周建民； 汪明；

【机构】 中国农业大学动物医学院；

【摘要】 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别从柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenellaGS,Et GS)和堆型艾美耳球虫青海株(E.acervulina QH,Ea QH)孢子化卵囊的子孢子中提取的总RNA 扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原3-1E 基因(Et GS 3-1E 和Ea QH3-1E)。将Et GS 3-1E与原核表达载体pGEX-6P1连接,构建了的pGEX-3-1E 原核表达质粒,并获得融合蛋白的高效表达和纯化。序列分析表明:Et GS 3-1E 和Ea QH 3-1E 的ORF 均为513个碱基,共编码171个氨基酸。Et GS 3-1E 的蛋白分子量为18.5 KDa,Ea QH 3-1E 的蛋白分子量为18.6 KDa。ORF 比较,Et GS3-1E 与文献报道的Ea3-1E 比较,共有2个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.8%,有1个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为99.4%;Ea QH 3-1E 与文献报道的Ea 3-1E 比较,共有4个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为97.7%,有3个氨基酸变异,氨基酸同源性为98.3%;Et GS 3-1E与Ea QH 3-1E 比较,有3个核苷酸发生变异,核苷酸同源性为98.2%,有2个氨基酸发生变异,氨基酸同源性为98.8%。获得了Et GS 3-1E 融合蛋白的高效表达和纯化,表达率达43.2%。更多还原