抗猪肺炎支原体特异性P36蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

【作者】 胡茂志； 焦新安； 潘志明； 黄金林； 邵国青； 刘秀梵；

【机构】 扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室； 扬州大学生物科学与技术学院； 江苏省农业科学院兽医研究所；

【摘要】 表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀。可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测:同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只)。利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2。生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×106;免疫球蛋白亚类为IgG2a。免疫印迹结果显示,腹水单抗与GST-P36融合蛋白反应而不与GST蛋白反应,并且在猪肺炎支原体(Mhp)蛋白36kD位置也有明显的条带,说明细胞株5A7-2所分泌的是针对Mhp P36蛋白的单抗。P36蛋白携带Mhp种特异性抗原表位,并且重组P36蛋白的抗体也不与其它支原体或细菌反应,因此,其单克隆抗体的制备,为Mhp种特异性检测方法的建立奠定了基础。更多还原