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用鸡体偏嗜性密码子对H5亚型禽流感病毒HA基因的优化与构建及其DNA疫苗体外表达研究
【作者】 姜永萍； 李呈军； 张洪波； 步志高； 张芳芳； 于康震； 陈化兰；
【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室； 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室； 农业部畜牧兽医总站；
【摘要】 不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异。为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD,1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA和pCIoptiHA分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24-48小时293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Western-blot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因。这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础。
【关键词】 HA基因；
密码子优化；
重叠延伸PCR；
间接免疫荧光；
Western blot检测；
【基金】 国家重点基础研究规划“973”(G1999011902)项目资助。
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集（下册）
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
- 【会议时间】2004-09
- 【会议地点】中国北京
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会