从EST到全长cDNA基因克隆策略研究——基因特异性引物介导的反转录用于cDNA 5’末端扩增

【作者】 徐学文； 邢双； 李奎； 樊斌； 朱猛进； 余梅； 熊统安； 刘榜；

【机构】 华中农业大学动物分子生物学与育种实验室；

【摘要】 <正>1 引言和目的在拥有丰富EST信息之后,利用电子延伸结合实验验证的方法从EST克隆全长cDNA的关键就在于实验验证过程。RACE(Rapid Amplification of cDNA End,RACE)方法是实现这一过程的常选途径,但是对于很多序列较长的基因直接采用RACE方法却未必有效。因此常通过RT-PCR技术先扩增验证部分序列,再通过RACE方法获得序列的全长。但是cDNA 5’末端因为GC含量高而使RT-PCR常遭失败。本研究通过自行设计基因特异性反转录引物(Gene-Specific Reverse Primer, GSRP)介导合成cDNA,为解决cDNA 5’末端高GC含量片段的RT-PCR这一难题提供了借鉴。更多还原