抗克伦特罗单克隆抗体杂交瘤的建立及其分泌单抗的免疫学特性鉴定

【作者】 王选年； 周继勇； 冯春花； 杨艳艳； 邢广旭； 李青梅； 杨继飞； 书军； 赵东； 王新华； 康晓笛； 张改平；

【机构】 浙江大学动物科学学院； 新乡市畜牧兽医工作站； 河南省农业科学院生物技术研究所； 河南百奥生物工程有限公司；

【摘要】 用重氮化法将半抗原CL偶联于载体蛋白BSA,形成结合抗原BSA-CL。以BSA-CL免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术建立了特异性的分泌克伦特罗单克隆抗体细胞株。筛选出C-4C1、C-2H6、C-2D6和C-4C9 4株高敏感性和高特异性杂交瘤生产单抗,其单抗的间接ELISA效价分别为5×10^-5、3×10^-4‘、6×10^-4、×10^-5;同种型分别为IgG₁/k、IgG₁/k、IgG_2a/k、IgG_2a/λ。C-4G₁的亲和力常数K=1.68×10⁸L/mol,C-2H6的亲和力常数K=1.3×10⁸L/mol。经WestCold蛋白质印迹鉴定单抗与CL特异性结合。C-4G₁单抗对CL的半数抑制浓度(IC₅₀为7.94ng/mL,对沙丁胺醇（SB）的IC₅₀为1000ng/mL,对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素和来克多巴胺的IC₅₀均≥6400ng/mL;C-4G₁单抗与Sb的交叉反应性为0.79%,与异丙肾上腺素的交叉反应性为0.12%,而与肾上腺素、去甲肾上腺素、来克多巴胺、各类抗生素及多种维生素均无交叉反应性。更多还原