节点文献
用长距离RT-PCR扩增并克隆鸡传染性法氏囊病病毒的大节段全长基因组
【机构】 浙江大学动物预防医学研究所；
【摘要】 使用长距离RT-PCR方法扩增并克隆了一种双链RNA病毒-鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的大节段全长基因组。首先比较4种病毒纯化和基因组抽提方案.发现超速离心后用蛋白酶K消化病毒粒子是较好的方法.所得dsRNA不用精制模板即可直接进入RT-PCR体系。在50 ℃下用Supersoript Ⅱ酶反转录合成单链cDNA.经RNase H除去杂交链的RNA后.用一对引物直接扩增到预期分子量的片段。PCR产物克隆并测序.序列分析证实获得了3259 bp的大节段全长。该方法优于传统的双链RNA病毒分段克隆策略,大大简化了克隆程序。
- 【会议录名称】 中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集
- 【会议名称】中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会
- 【会议时间】2002-10
- 【会议地点】中国四川成都
- 【分类号】S852.65
- 【主办单位】中国畜牧兽医学会禽病学分会（Poultry Health Branch, Chinese Association of Animal and Veterinary Science）