孕兔子宫内膜淋巴细胞(EML)的制备及活性检测

【作者】 沈文正； 靳亚平； 李引乾； 马勇江；

【机构】 杨凌职业技术学院动物工程系； 西北农林科技大学畜牧兽医学院；

【摘要】 手术法无菌取出妊娠第9天和22天孕兔的子宫内膜,分别用浓度为5.0g/L、2.5g/L和1.25g/L的胰酶按不同方案进行对比消化,依次用200目和400目滤网过滤,常规分离淋巴细胞,按不同方案饱和湿度恒温培养。部分兔淋巴细胞中还加入等量1μg/mL雌二醇（E₂）、2mg/mLPHA及CD₅₈（花环抑制率为80％）,并设立细胞对照和空白对照,并用倒置显微镜观察其活化和增殖情况。用酶标仪以570nm波长测定各孔培养物的OD值,并进行统计分析。 兔EML培养35h后显微镜观察,雌二醇处理组细胞明显增殖,排列较为密集;PHA及CD₅₈处理组的细胞也有不同程度的增殖,排列稍稀疏。同时,1.25g/L胰酶组的细胞比2.5g/L组的更密集。 统计分析表明,用浓度为2.5g/L或1.25g/L的胰酶冷消化（4℃）450或535min,可分离到正常的子宫内膜淋巴细胞（EML）;培养检测条件单独作用或与酶浓度共同作用分别可极显著（P<0.01）或显著影响（P<0.05）孕兔EML的活化。进而证明,孕兔子宫内膜经冷消化（4℃）535min,所获淋巴细胞培养48h,MTT作用72h,SDS—DMF作用12h后测定OD值,是孕兔EML制备及活性检测的理想条件。本研究还发现,E₂、PHA及山羊CD₅₈对孕兔EML活化的促进作用均极显著高于细胞对照组,这就初步肯定了三者对EML的激活作用。三者之间对兔EML活化作用的影响在统计学上差异尚不明显（P>0.05）,但雌激素组的活化作用最强。更多还原