伪狂犬病病毒鄂A株gG~-/LacZ~+突变株在不同细胞中增殖规律的研究

【作者】 方六荣； 陈焕春； 肖少波； 何启盖； 吴美洲； 汪超；

【机构】 华中农业大学动物病毒室；

【摘要】 伪狂犬病病毒鄂A株gG^-/LacZ⁺突变株是专为种猪免疫构建的基因缺失标志灭活疫苗株,临床试验证明具有很高的保护力,并可用于种猪伪狂犬病的根除计划。为了确定该疫苗株的最适增殖细胞、最佳接毒剂量和收毒时间,以便为今后大规模化生产提供依据,取TCID₅₀值为10^-5.7/0.1ml的冻存毒种,经多次空斑纯化后,获得最高滴度达10^-8.0/0.1ml的克隆毒。以0.01PFU/cell的量分别接种BHK-21、IBRS-2、MDBK、PK-15四种伪狂犬病病毒易感细胞,观察细胞病变的过程,并于接毒吸附完成后每隔8h收毒测定TCID₅₀,发现BHK-21在接毒后12小时就发生明显的病变,IBRS-2、PK-15分别在接种后16h、18h出现病变,而MDBK病变最慢,24小时才有病变;在病毒增殖滴度方面,IBRS-2、PK-15均在接毒后40h滴度达到高峰,高于10^7.5/0.1ml,并可维持24h;MDBK于接种后56h达到增殖高峰,但滴度较低,在10^-7.0/0.1ml左右,维持时间在16h左右;尽管BHK-21细胞也是在接种后40h达到增殖的高峰,但滴度仅为10^-6.5/0.1ml,维持时间也只有16h。再以不同剂量接种IBRS-2细胞,并于细胞完全病变后收毒测定TCID₅₀,发现以0.1PFU、0.01PFU接毒,并在接毒后30h、48h收毒的毒价最高,达10^-8.0/0.1ml,上述结果表明:以0.01PFU/cell的剂量接种IBRS-2细胞并在接毒后40—50小时收毒为为最佳培养条件。更多还原