鸡γ—干扰素基因的克隆及表达

【作者】 钱建飞； 刘宏梅； 凌雯； 李银； 张则斌；

【机构】 江苏省农科院畜牧兽医研究所；

【摘要】 应用逆转录多聚酶链式反应(RT—PCR)技术,以自行设计合成的一对引物,从ConA激活的SPF鸡外周血淋巴细胞中,扩增出了鸡γ—干扰素(ChIFN—γ)基因。将ChIFN—γ基因插入pMD18—T栽体,构建成pMDChIFN重组质粒,经酶切鉴定和DNA序列测定,表明克隆片段为ChIFN—γ基因。应用DNA重组技术,将ChIFN—γ基因克隆到原核表达质粒pBV220 PRPL启动子下游,构建成pBVChIFN—1重组表达质粒,转化大肠杆菌DH5α,通过温敏诱导表达,在大肠杆菌中成功地表达了ChIFN—γ,其表达水平占全菌总蛋白的9％,经微量细胞病变抑制法测定其生物学活性,重组ChIFN—γ抗水泡性口炎病毒(VSV)的效价达1:32。为ChIFN—γ进一步研究和开发应用奠定了良好的基础。更多还原