利用cDNA-AFLP分析水稻根伸长过程中水分胁迫诱导基因的表达

【作者】 杨玲； 郑炳松； 毛传澡； 易可可； 刘非燕； 吴运荣； 吴平；

【机构】 浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室；

【摘要】 <正> cDNA-AFLP技术的优点在其引物较长,可使用更严谨的退火条件,因此比差别显示技术重复性更好; cDNA-AFLP还可以克服丰度问题,是高敏感的技术;芯片技术只能分析克隆了的基因的表达,而cDNA-AFLP可分析任何带有限制性酶切位点的基因的表达变化,因此也是发现新基因的有效工具。短期旱作极显著(P<0.01)促进水稻种子根的伸长。于旱作处理4h、16h、48h、72h时取样(种了根尖0～1cm),分别提取RNA、纯化mRNA、合成双链cDNA,用TaqⅠ/AseⅠ酶切后,加接头进行预扩增和选择性扩增,经6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染,得到80～1000bp的条带。共做了100对引物组合,得到约6000个片段。106个片段在受旱作处理的72h过程中被诱导表达,从中随机选择了16个片段,用Northern杂交证实了他们的cDNA-AFLP表达模式,说明cDNA-AFLP的结果可靠。这106个片段全部被回收、克隆、测序,对运用生物信息学进行详细分析。旱作刺激种子根的伸长生长涉及多个生化途径和生理过程。在61个已知功能的基因中,有脱落更多还原