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烟草野火病原菌hrpZpsta基因的克隆与表达
Clone and expression of hrpZPsta genes from Pseudomonas syringae pv.tabaci
【机构】 吉林农业大学农学院植保系；
【摘要】 根据Genebank序列（登录号为AB112555）hrpZ基因的ORF序列设计一对引物,以烟草野火病原菌的基因组DNA为模板,经PCR扩增获得423bp基因片段。将此片段克隆测序,结果显示所获得的烟草野火病菌的hrpZ序列,与Genbank的hrpZ基因同源性为100%,把所获得基因命名为hrpZPsta。根据质粒pGEX-4T-1和hrpZPsta设计引物进行PCR扩增,将PCR产物和质粒pGEX-4T-1用EcoR1/BamH1双酶切、连接,成功构建重组表达质粒pGEX-hrpZPsta,把重组质粒转化至大肠杆菌BL12（DE3）菌株,经筛选得到的阳性克隆菌,IPTG诱导表达HrpZPsta蛋白。SDS-PAGE显示,目的蛋白在重组菌株中得到了可溶性高效表达。该重组蛋白分子量为41.2kD与理论值相符。采用注射法,融合蛋白具有引起番茄叶片过敏性坏死的生物活性。
【基金】 农业部转基因专项“抗病虫转基因大豆新品种培育”(2008ZX08004-004)
- 【会议录名称】 第四届中国植物细菌病害学术研讨会论文集
- 【会议名称】第四届中国植物细菌病害学术研讨会
- 【会议时间】2008-11
- 【会议地点】中国浙江杭州
- 【分类号】S432.4
- 【主办单位】中国植物病理学会植物病原细菌学专业委员会、中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害国家重点实验室、浙江大学水稻生物学国家重点实验室、浙江大学生物技术研究所