杀蛴螬的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cry8基因的PCR-RFLP分析

【作者】 束长龙； 王容燕； 张杰； 冯书亮； 王金耀； 黄大昉； 宋福平；

【机构】 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室； 河北省农林科学院植物保护研究所； 中国农业科学院生物技术研究所；

【摘要】 建立了cry8类基因PCR-RFLP鉴定系统。根据所有已知的cry88类基因(cu8Aa、 cry8Ab、cry8Ba、cry8Bb、cry8Ca、cry8Da)的DNA序列保守区设计了一对通用引物,利用这对引物对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的基因组DNA进行PCR扩增,产生 2．1kb产物,用限制性内切酶KpnI和DraI消化扩增产物,电泳分析酶切片段长度多态性 (RFLP),从而确定菌株的cry8类基因类型。用此方法检测对蛴螬有效的40株苏云金芽孢杆菌菌株,发现4种类型的RFLP图谱。有7株含有产生1 416bp、757bp片段的基因与已知 cry8C基因相似,其中japonensis Buibui、H06与HBF-1三株对铜绿丽金龟(Anomala carpulenta Motschulsky)有毒力,另外4株对暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela Motschulsky)有毒力;有6 株产生1 293bp、889bp片段的RFLP图谱,但对铜绿丽金龟(Anomala carpulenta Motschulsky)、暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela Motschulsky)和大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)没有毒力; 以BT185为例的16株菌株所含cry8基因的RFLP图谱显示有1 817bp、1 293bp、889bp、 335bp 4个片段,片段大小和为4．2kb,推测含有两种基因类型,这些菌株均对暗黑鳃金龟 (Holotrichia parallela Motschulsky)有毒力;有8株菌株所含cry8基因的RFLP图谱显示有1 267bp、570bp、326bp片段,它们对大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)有毒力。后3种RFLP图谱与已知的cry8类基因RFLP图谱完全不同,菌株中可能含有新的cry8基因类型。更多还原