【作者】 徐同； 刘梅； NZOJIYOBIRI Jean-Berchmans； 覃宏涛； 孙宗修；

【Author】 XU Tong, LIU Mei, NZOJIYOBIRI Jean-Berchmans, QIN Hong-Tao, SUN Zong-Xiu,(College of Agriculture and Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou, 310029; Key Laboratory for Rice Biology, Ministry of Agriculture, China National Rice Research Institute,Hangzhou, 310006)

【机构】 浙江大学农业与生物技术学院； 中国水稻研究所农业部水稻生物学重点实验室；

【摘要】 木霉是普遍存在的一类真菌,许多木霉菌株对植物病原菌有明显的抑制作用,本实验室以往的研究表明,哈茨木霉（Trichoderma harzianum）菌株对多种植物病原真菌具有明显的抑制作用,在温室及网室试验中对水稻纹枯病（Rhizoctonia solani）具有较好的防治效果。本文报导利用木霉及其基因提高水稻抗病性的研究结果。用农杆菌介导法将CaMV35S启动子调控下的木霉内切几丁质酶基因ThEn-42转入粳稻品种台北309中。对100多株T₀代再生植株进行了PCR鉴定,结果表明90%以上的植株为阳性植株,Southern检测的结果进一步证实外源基因已经整合到水稻基因组中。对T₁代植株也进行了PCR鉴定和潮霉素抗性鉴定,结果表明大约70%的T₁代转基因株系符合3:1（阳性:阴性）的分离比,表明ThEn-42在这些株系中有单个插入位点;大约20%的T₁代株系分离比符合15:1,表明这些株系含有2个整合位点。选择部分T₁代潮霉素抗性阳性植株进行Southern杂交鉴定,结果进一步证实外源基因已经稳定地遗传给T₁代。抗病性检测表明大部分T₀代和T₁代转基因植株表现对水稻纹枯病和两个分别属于A群和B群的稻瘟病小种的抗性,有几个株系的抗性与对照相比有显著差异,其中Tp64表现对两个稻瘟病小种完全免疫。这些结果表明木霉内切几丁质酶基因ThEn-42已经在受体植物中准确表达,并且在提高水稻抗病性方面起了重要作用。在温室条件下用哈茨木霉NF9菌株进行种子处理,诱导水稻感病品种原丰早幼苗对稻瘟病（Magnapothe grisea）和白叶枯病（Xanthomonas oryzae pv.oryzae）的抗病性,其抗性表现为中抗,对稻瘟病菌不同菌株（SY1、H16）以及对白叶枯病菌不同菌株（CR1、CR7）的抗性表现无显著差异。经木霉种子处理的水稻幼苗接种稻瘟病菌或白叶枯病菌后,过氧化物酶（POD）及（或）苯丙氨酸转氨酶（PAL）活性增强,在某一时段显著高于未经木霉种子处理的对照。尤其是在接种白叶枯病菌CR1后16h、96h,经木霉处理的苯丙氨酸转氨酶（PAL）酶活性显著高于对照。以上研究结果表明,诱导抗性可能是哈茨木霉NF9菌株的生防机制之一。更多还原