DAT1相互作用蛋白的筛选

【作者】 惠玲； 季朝能； 蔡文琴； 顾少华； 应康； 谢毅； 毛裕民；

【机构】 第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室； 复旦大学生命科学院遗传所； 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室；

【摘要】 <正>目的:DAT1是LMO家族成员之一,在多巴胺刺激星形胶质细胞时上调表达,目前所知在神经系统有广泛表达,但具体作用未知。本文拟利用酵母双杂交系统筛选人胎脑组织中能与多巴胺相关转录因子DAT1的LIM2相互作用的蛋白质,以初步了解DAT1的功能。方法:构建酵母双杂交诱饵质粒pLexA-LIM2,筛选人胎脑cDNA文库,并用酵母交配试验初步验证。结果:(1)果表明融合质粒pLexA-LIM2克隆成功。将此pLexA-LIM2质粒用LiAc法转化酵母双杂交报告菌株EGY48(p8op-LacZ),将阳性的菌落涂布在加有X-Gal的SD/Gal/Raf/-His/-Ura营养缺陷型诱导平板,更多还原