血清预培养可促进神经干细胞的增殖

【作者】 历俊华；

【机构】 北京市神经外科研究所；

【摘要】 <正>目的:介绍一个既省时、耗资又少的神经干细胞培养方法。方法:大鼠胚胎NSCs体外培养: 取孕14-16d Wistar大鼠,脱臼处死,75%酒精浸泡消毒,取胎鼠,脑组织置于Hank’s液中,解剖显微镜下剥离软脑膜及血管,眼科剪剪碎脑组织,过200目铜网,滤过的细胞分别收集于2个离心管中,800r/min离心5min,弃上清,A组加含10%胎牛血清DMEM培养液,培养48 h后换含EGF、bFGF、B27的DMEM/F12培养液,B组直接加含EGF、bFGF、B27的DMEM/F12培养液,37℃, 5%CO2培养箱培养1周。免疫荧光染色:A组和B组神经干细胞球培养后1周,10%胎牛血清DMEM 培养液分别诱导其分化,在诱导分化后的第5天和第10天取细胞,PBS冲洗,4%多聚甲醛室温固定30 min,用含1%正常羊血清、1%牛血清、0.5%牛血清白蛋白、0.1%Triton X-100的PBS孵育30 min,以阻断非特异性反应。加抗nestin、GFAP、GaLC和MAP2抗体,4℃孵育过夜。PBS冲更多还原