人乳牙牙髓基质细胞分离培养和牙再生能力的研究

【作者】 林云锋； 陈希哲； 田卫东； 闫征斌； 李志勇； 敬伟； 汤炜； 刘磊； 郑晓辉；

【机构】 四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科；

【摘要】 目的分离培养儿童乳牙牙髓基质细胞,比较研究牙向诱导前后牙本质涎磷蛋白表达和钙盐形成的差异。方法牙髓取材自8名8～10岁儿童拔除的滞留乳磨牙,通过组织块贴壁法获得乳牙牙髓基质细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中原代培养14d,消化传代后用添加有1×10-8mol/L地塞米松,50mg/L左旋抗坏血酸,10nmol/L维生素D3,10mmol/Lβ-磷酸甘油钠的DMEM/F12培养基诱导培养14 d,观察细胞形态变化和生长规律,通过免疫细胞化学染色比较诱导前后牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达差异,通过茜素红染色比较诱导前后钙盐形成的能力。结果乳牙牙髓基质细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,经牙向诱导14d后细胞由梭形转变成多角形和柱型,胞核大而圆,80%以上细胞的细胞质DSPP表达阳性,而且形成了钙化结节。而未经诱导的细胞仍为梭形,仅有2%的细胞DSPP染色呈阳性,未见钙化结节的形成。结论乳牙牙髓基质细胞经牙向诱导培养后具有向成牙本质细胞分化的潜能,而且可以在体外形成钙化结节,可以尝试作为组织工程牙再生研究新的种子细胞。更多还原