新邻苯二甲酰亚胺类似物的体外抗癌活性及其抑制NF-κB传导通路作用的研究

【作者】 孙婉； 易文渊； 李敏； 徐波； 崔景荣；

【机构】 北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室；

【摘要】 目的:沙利度胺因为严重致畸作用而而与上世纪60年代被停用,由于其明显的抗血管生成和抑制 TNF-α产生的作用,以及对多种肿瘤和免疫性疾病具有广泛的临床应用价值,重又被批准上市并得到使用。为了进一步增强药理作用而降低沙利度胺的毒、副作用,大量沙利度胺类似物被合成和生产并得到认可和更广泛的应用。研究表明,沙利度胺的抗炎和抗血管生成作用有可能与其抑制信号传导分子 NF-κB 的作用有关。我们首先合成沙利度胺及其新类似物—N 端糖基取代的邻苯二甲酰亚胺化合物(STA-35),检测其体外抗肿瘤作用,并利用人宫颈癌细胞(HeLa)研究其对 NF-κB 及其它信号传导通路的影响。方法:采用 SRB 法检测 STA-35 对 HeLa 细胞的抗增殖活性。应用高内涵筛选分析技术研究化合物诱导细胞凋亡作用、化合物对 TNF-α诱导的 NF-κB 核转位的抑制作用以及对其他几种相关的细胞内信号分子如 ERK,p38 和 Nrf2的影响。Western blotting 技术则用于进一步研究 STA-35作用下 NF-κB 相关蛋白在胞浆和胞核中表达的变化。结果:经过48h 的作用,STA-35对 HeLa 细胞生长具有明显的抑制作用, 并随着浓度增加(1μM-60μM),作用逐渐增强;而同样浓度的沙利度胺对 HeLa 细胞几乎没有作用。高内涵检测分析发现,STA-35能够浓度和时间依赖性地诱导细胞核固缩,细胞膜通透性以及线粒体膜电位的增加。同时,STA-35对 TNF-α诱导的 NF-κB 核转位具有明显的抑制作用, 具有明显的时间与浓度依赖性。40μM 的 STA-35作用60min 时抑制率可达94．95%。而相同作用时间和浓度梯度的沙利度胺几乎没有上述抑制作用。Western blotting 的实验结果进一步证实了化合物对 NF-κB 传导通路的抑制作用。STA-35可时间和浓度依赖性地阻止 NF-κB p65蛋白由胞浆至胞核的转移以及胞浆内 IκB-α的降解。此外,STA-35还可激动细胞内信号分子 ERK, p38和 Nrf2,该作用也呈明显时间和浓度依赖性。结论:我们的研究结果表明新的沙利度胺类似物 STA-35可明显抑制肿瘤细胞的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,并且是 NF-κB 活性的抑制剂。其作用明显强于沙利度胺,是一个具有较好开发、利用前景的抗肿瘤候选化合物。更多还原