大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖周期影响的实验研究

【作者】 廖子君； 宋永春； 党诚学； 陈晓泉；

【机构】 陕西省肿瘤医院内一科； 西安交通大学第一医院肝胆外科；

【摘要】 目的:观察大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖及周期的影响。方法:设计空白对照组及不同浓度的大黄素组。采用MTT比色法测定对照组与实验组A549细胞生长的抑制率,将50mg MTT溶于10ml PBS(0．01mol／L), 调整PH为7．4,过滤除菌,置棕色瓶,4℃贮存,即为5mg／ mL MTT贮存液。实验分为对照组(未经药物处理的A549 细胞),实验组(共5个大黄素浓度梯度:0,25,50,100, 200和400 μg／ml),共6组,每组6个复孔。调整A549细胞浓度为1×105个／ml,每孔200 μl接种在96孔板中, 培养24h后,实验组加入不同浓度的大黄素至终浓度,分别继续培养48小时,于实验终止前4小时加入MTT贮存液 20 μl／孔,继续于5％C02饱和湿度37℃培养箱中孵育至实验终止,弃上清,每孔加入二甲基亚砜(DMSO)150 μl于 10分钟内在全自动酶标仪上室温避光振荡混匀并于490nm 波长测定各孔的OD值。按公式:GI(生长抑制率)=1-(实验组OD值／对照组OD值)×100％,计算各组的生长抑制率。应用流式细胞仪分析A-549细胞增殖周期的变化,取对数期A549细胞(2×106),培养24h后,在培养液中加入不同浓度大黄素(25,50,100,200和400 μg／ml),继续培养48h,胰酶消化,PBS洗涤细胞2次,1000r／min离心10min,弃上清,70％冷乙醇4℃固定过夜,RNA酶消化,碘化丙啶(PI)避光染色30min,,采用SPSS11．5统计分析软件进行统计学处理。结果:不同浓度的大黄素作用于A549细胞后,活细胞数发生变化,这种变化呈剂量依赖性,细胞的生长有不同程度的抑制。接种后的细胞在48至 96小时处于对数生长期,25μg／ml的大黄素作用72小时后对A549即有明显的抑制作用,100μg／ml的药物作用48 小时后,对细胞生长抑制率可达到54．6％,而400μg／ml 大黄素组几乎未见活细胞,经大黄素刺激后的A549细胞周期各时期的细胞数占细胞总数的百分比与对照组比较差异有显著性(P<0．05),S期和G2+M期细胞比例显著降低, G0+G1期细胞比例相对增加,并呈剂量相关性。结论大黄素对人肺腺癌A-549细胞的增殖生长具有显著的抑制作用,其抑制作用呈浓度依赖型,其抑制率随药物浓度升高而增加,与对照组之间有显著性差异(P<0．05),并可使 A-549细胞增殖周期停滞于G0／G1期而阻止其进入S期及 G2／M期。更多还原