【作者】 孙瞳； 马素芳； 谭文； 石远凯； 姚嘉瑞； 高扬； 郭永丽； 杨明； 曾长青； 林东昕；

【Author】 Sun Tong Ma Su-Fang Tan Wen Shi Yuan-Kai Yaojia-Rui Gao Yang GuoYong-Li Yang Ming Zeng Chang-Qing Lin Dong-Xin Departments of Etiology and Carcinogenesis, Cancer Institute, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, China Beijing Genomics Institute, Chinese Academy of Sciences, Beijing, China

【机构】 中国医学科学院协和医科大学肿瘤研究所病因及癌变研究室； 中国科学院北京基因研究所；

【摘要】 目的:恶性肿瘤的发生发展与肿瘤免疫能力低下密切相关,因此探讨肿瘤免疫能力低下的遗传机制有助于理解肿瘤发生的内在原因。本研究探讨细胞死亡通路关键基因 caspase-8的遗传变异,变异对肿瘤免疫细胞凋亡的作用及其与肿瘤发生的相关性。方法:首先利用国际单体型计划数据库中染色体2q33相应区域内汉族人群的161个SNP分型资料, 构建连锁不平衡区并选取14个标签SNP进行肺癌病例-对照关联研究。然后对显示与肺癌发病风险增加相关的caspase- 8基因启动子区进行测序以寻找所有的序列变异。以电泳迁移率变动实验,双荧光素酶报告基因实验,染色质免疫共沉淀实验,实时定量PCR分析序列变异对基因功能的影响;以离体T淋巴细胞激活诱导凋亡实验检测caspase-8基因型与表型的关系;以大样本量的病例-对照研究方法确定遗传变异与常见肿瘤发生风险的关系。结果:2q33区域caspase-8启动子区附近的4个相邻标签SNP与肺癌发病相关(P=1．32× 10-0.5～1．17×10-12)进一步测序发现caspase-8启动子区3个遗传多态,分别是-856C>G,6个碱基插入／缺失(-652 6N ins／del)和-614A>G。电泳迁移率变动和染色质免疫共沉淀实验证实-652 6N ins形成一个转录因子Spl结合位点。双荧光素酶报告基因实验显示,-652 6N ins的caspase-8启动子活性显著高于-652 6N del的caspase-8启动子活性。携带-652 6N ins基因型者外周血淋巴细胞caspase-8 mRNA 含量显著高于6N del基因型(4224．9±1942．4比2472．4± 518．1,P=0．013),经anti-FAS诱导后,-652 6N ins基因型携带者T淋巴细胞caspase-8活性(13．25±4．51比7． 78±3．98,P=0．007)和凋亡率(34．13±12．70比22．12 ±8．99,P=0．011)均显著高于-652 6N del基因型携带者。肺癌(n=1149)、食管癌(n=1018)、胃癌(n=420)、结直肠癌(n=918)和乳腺癌(n=1095)的病例-对照(n=2500)分析显示,-652 6N ins基因型与这些肿瘤发病风险增高相关 (OR=1．40-1．90)。结论:Caspase-8启动子-652 6N ins／del变异是肿瘤发生的遗传易感因素,其机制可能与- 652 6N ins导致caspase-8转录活性增高,从而加速肿瘤刺激后T淋巴细胞凋亡使肿瘤细胞逃脱免疫杀灭有关。更多还原

【Abstract】 Caspases are at the crossroads of immune-cell life and death, however, the suppression of immune cells could offer the susceptibility to cancer. Caspase-8, caspase-10 and CFLAR, two initiator apoptotic caspases and one modulator of apoptotic process, were located in adjacent region in human chr2q33. We looked for gene variants associated with cancer in this region by haplo-type-tagging SNP (htSNP) approach with HapMap genotyped data. Association studies identified a 6nt ins/del variant in caspase-8 promoter, which resulting in abolishment of a Sp1 binding site and alteration of caspase-8 expression level, confers significant susceptibility to lung cancer. Ex vivo functional analyses showed that the caspase-8 activity and latent apoptotic ability of T lymphocytes were affected by caspase-8 -652 6nt ins/del variant. The caspase-8 -652 6nt ins/del variant also was shown to be a susceptibility-associated factor in esoph-ageal caner, gastric cancer, colon cancer and breast caner in Chinese population. These studies suggest that variant of immune cell regulation gene with attenuated function may account for a susceptibility to common cancer.更多还原