白血病患者WT1基因表达及其临床意义

【作者】 李洪滨； 张清媛； 李晓云； 吴丹； 姜季；

【机构】 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院内三科；

【摘要】 目的:探讨Wilms’瘤基因(WT1)在白血病中表达情况与临床意义。方法:对象:K562白血病细胞系、78例急性白血病(AL)患者、10例慢性粒细胞白血病(CML)患者、2例淋巴瘤白血病(LBL)患者、1例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者和30例正常对照的骨髓或外周血细胞。方法:采用筑巢式逆转录聚合酶链反应(Nest RT—PCR)检测上述标本的WT1及β-actin的表达。产物于含溴化乙锭的琼脂糖凝胶中电泳;采用TanonCIS2010数码图象处理系统观察结果。WT1表达半定量分析:以患者标本的β-actin为内对照,对扩增产物的电泳条带进行灰度分析,以同一标本的WT1/β—actin的灰度比表示WT1的相对表达量。WT1阳性表达的K562细胞相对表达量为1.0,实验结果取被测标本与K562细胞WT1相对表达量之比。统计学处理采用t检验,q检验,F检验,Fisher’精确概率检验。结果:30例正常对照未检出WT1表达,WT1在各型初治或复发AL患者中均有表达,总阳性率73.3%,各型间阳性率元明显差异。经Fisher’精确概率检验,初治或复发AL患者WT1阳性CR率(36.4%)与WT1阴性CR率(87.5%)有显著差异,WT1阴性CR率显著高于WT1阳性CR率(P=0.035<0.05);初治或复发ANLL与ALL患者WT1表达阳性率(77.3%和83.3%)无显著差异。初治或复发AL患者(1组)、完全缓解(CR)患者(2组)和长期CR患者(3组)WT1表达水平比较。1组WT1阳性表达22例,2、3组WT1阳性表达28例,经t检验,两组患者WT1表达水平不同,2、3组WT1表达水平显著低于1组(t=2.533,P<0.05)。动态观察7例1组及2组WT1表达均阳性的患者,经配对t检验,两组WT1表达水平不同,2组WT1表达水平显著低于1组(t=3.064,P<0.05)。动态观察4例三组WT1表达均阳性的患者,经F检验,三组WT1表达水平不同(F=9.759,P<0.01);经q检验,1组与2组,1组与3组之间WT1表达水平不同,2组及3组WT1表达水平均显著低于1组(q值分别位5.76和4.98,P均<0.05)。动态观察10例2组及3组WT1表达均阳性的患者,经配对t检验,两组WT1表达水平不同,3组WT1表达水平显著低于2组(t=3.683,P<0.01)。经动态观察,部分CR期AL患者于复发前WT1表达水平重又升高。10例CML患者中仅2例急淋变者表达WT1,且CR后表达水平下降,其余8例慢性期患者未检出WT1表达。2例LBL患者均表达WT1,但水平较低。1例CLL患者未检出WT1表达。RT-PCR检测WT1的灵敏性:取K562细胞与正常人外周血单个核细胞按1:10,1:102,1:103,1:104,1:105,1:106倍比稀释,然后用RT-PCR测定WT1表达。结果显示测定灵敏性10-4-10—5。结论:WT1在各型AL中均有表达,在ANLL及ALL中表达无明显差异,可作为泛白血病标志。WT1阳性患者CR率低,提示可能导致差的预后。通过对部分病例WT1表达水平进行动态观察,发现初治和复发时WT1表达水平较高,CR后其表达水平明显下降,并随缓解期延长,其表达水平下降更多。若其表达水平重又升高,则很有可能复发,且比形态学发现较早。本文采用RT—PCR检测WT1表达,其敏感性达10—4-10—5,故监测WT1表达可作为判定AL之微小残留病的敏感指标。更多还原